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科研無小事(一)細胞的STR鑒定

發布(bù)時間:2021-06-01      點擊次數:465

做(zuò)實驗的時候才發現細胞(bāo)的種類太多(duō),於(yú)是我們需要查詢各種文獻看每個細(xì)胞的特(tè)征,從而設計實驗規(guī)劃與步鄹(zōu),我們在(zài)緊湊的(de)實驗種完美了(le)實(shí)驗,提交文章的時候,才(cái)發現,需要細胞鑒定。

據統計約30%細胞係被交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染或錯誤辨識,因使用了交叉汙染或錯誤辨識的細(xì)胞(bāo)而導致研究結論錯誤、結(jié)果不可重複、臨床細胞(bāo)治療災難(nán)性後果(guǒ)……這浪費大量時間、精力和金(jīn)錢。因此NIH、ATCC等權威(wēi)機構多(duō)次發出呼籲(yù),要求研究者對細胞進行鑒定,最近美媒報(bào)道1/6科學家在研究使用“假冒”細胞(bāo),2014年12月、2015年2月Science雜誌分別發表文章專(zhuān)題闡述(shù)細胞交叉汙染和錯誤辨識的嚴重性;2015年(nián)4月Nature通知:Nature旗下所有雜誌將要求作者(zhě)鑒定論文中所用細胞係;2015年6月即有報道稱一科學家(jiā)因用錯細胞係,撤銷Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機構對(duì)此多次發出呼籲(yù),要求研究者對細胞進行鑒定,STR基因分型已被作(zuò)為(wéi)金標準應用於細胞係鑒定(dìng),越來越多雜(zá)誌開始要求投稿人提供細胞STR鑒定結果。

在2011年美國(guó)就已經頒布了細胞STR鑒定(dìng)國家標(biāo)準(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR檢測已被廣泛應用於親子(zǐ)鑒定、個體識別、細胞來源判定等方麵。ATCC、DSMZ、JCRB等(děng)國際知名細胞庫已將STR基因分型列為細胞鑒定的金標(biāo)準。

STR鑒定已(yǐ)經成為(wéi)了細胞株的“身份證”能(néng)在科研界通行無阻(zǔ),必須要有STR。那麽動物源呢,因為建立的DNA條帶並不完善,目前隻有小鼠的部分細胞可以提供STR。

STR鑒定描述:

利用熒(yíng)光(guāng)標記(jì)擴(kuò)增產物長度多態分析(xī)方法對細胞樣(yàng)本(běn)進行9個/16個STR位點(diǎn)進行分型。設計PCR引物,組成2個PANEL用於(yú)擴增多態位點。位點的熒光標記(jì)采(cǎi)用引物上標記5’FAM熒(yíng)光標記。引物用在線Primer3 軟件設計(http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)。PCR產物稀釋後取少量與內標標(biāo)記混勻後直接(jiē)上ABI 3130xl進行毛細管電泳,數據文件用GeneMapper4.0(Appliedbiosesystems)來分析(xī)。

STR(Short Tandem Repeat,短串聯重(chóng)複(fù)序列)是一(yī)類廣泛存在於真核生物(wù)基因組中的DNA串聯重複序列(liè),由於其核心序列重複次(cì)數存(cún)在(zài)個體差異(yì)多態性,因此STR也(yě)被稱為細胞的DNA指紋。

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