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適用於多種生物工藝流程的全自動管式離心機(jī)

發布時間:2021-04-14      點擊次數:420

離心過濾技術在生物工業,細胞初級(jí)提取和細胞溶解物淨化處理上無所不在。這種技術特別是在處理高分子如疫苗(miáo),類病毒顆粒或結構鬆散的多糖分子及核酸上,較微細過濾法(fǎ)有更大的優勢。

管式離心機、碟片式離心機和螺旋式沉降(jiàng)離心(xīn)機作為離心過濾設備,在淨化生物製品上的(de)應用是非常普遍的。選擇使用哪一種離心機來處理,主要是看物料的本性、固(gù)體顆粒的濃度和(hé)沉降能力。

舉(jǔ)例來說,由(yóu)於沉降(jiàng)能力低,螺(luó)旋式沉降離心機(jī)隻能處理大顆粒的物料,如菌絲體或絮凝細胞。

碟片式離心機在生物過程處理中有很寬廣的適用性,它已經(jīng)長期運用在微生物細胞和內含體(tǐ)的(de)回(huí)收,細胞溶菌液的淨化。它有一個相對新(xīn)的應用領域是在哺乳細胞中的回收。如治療蛋白在哺乳細胞中(zhōng)是具有很低的(de)壓榨率(2g/L),因此在生產上(shàng)一次通常要處理大(dà)於15,000L的量。碟片式離心機的高生產能力,在這方麵的應(yīng)用是一個很好(hǎo)的選擇。但是,哺乳細胞對剪切力是非常敏感的,這種機器(qì)進料口會產(chǎn)生高剪切力,同時為了防止過高的流動(dòng)應力,離心機通常(cháng)的工(gōng)作轉速通(tōng)常低於(yú)最高轉速。碟片式離心(xīn)機能處理大量的(de)物料,但是排出的(de)沉(chén)降物是濕泥狀的。這種(zhǒng)濕泥是持續或間歇性的被噴(pēn)出,這製約了它對高密度(dù)細胞溶解液的回收,高(gāo)潔淨沉積產品溶液的下遊分離。

管式離心機在這些方麵的處理卻很有效。首先它的分離因素比碟片式離心(xīn)機(jī)更高,所以澄清(qīng)液更清,固相(xiàng)更幹燥,固相幹燥率可達40%;其(qí)次轉鼓(gǔ)內部沒(méi)有複雜的碟片,剪切力很小,同時產(chǎn)生(shēng)更低的(de)液體霧沫量(liàng)。但是管式(shì)離心(xīn)機需要間歇性停機卸料(liào),所以它的處理量不大。

選擇哪一種離(lí)心機還要考慮(lǜ)到生(shēng)物處理中需要(yào)的一(yī)些重要功能:如在位清洗(xǐ)(C.I.P),在位消毒(S.I.P)功能。

生物技術公司在臨床追蹤(zōng)潔淨治療,為了市場必須快速(sù)轉變新的方向。在這(zhè)過程中的一個關(guān)鍵要素(sù)是小型設備在其中起的雙重作用:為(wéi)臨床尋找GMP適應材(cái)料和為大批量(liàng)生(shēng)產起工藝示範作用。隨(suí)著從宿主細胞中提取的生物製劑種類不斷增加(jiā),工業上需要多用途的,可升級的機器來為臨床研究處理藥品。隻要離心分離符合這些需求,毫無疑問普遍都能獲利。然而,選擇一款合適的離(lí)心設(shè)備是不易的(de)。


這款離心機對於幹燥泥餅是(shì)半連續性的出料,同時擁有CIPSIP和全(quán)密封功(gōng)能。它(tā)有低剪切力的(de)噴嘴進料,高(gāo)效的活塞(sāi)機構直接出料(liào)的設計,這種設計提(tí)供了(le)一個內部無隔板,窄型的轉鼓結構。另外向上流動的模式,低剪切力進(jìn)料錐形腔,結合下溢式排水促進(jìn)更強的(de)浸注性,同時擁有一(yī)個穩定的,高壓的液體層麵,使分離效果達(dá)到最佳。

我們評定STC-5的淨化能力通過處理(lǐ)以下(xià)多種物料:完整細胞和酵母溶解(jiě)物,革蘭氏陽性的和陰性的微生物(wù)溶解物,及中國倉鼠卵巢的(de)哺乳細胞。我們用哺乳細胞溶解物和(hé)一(yī)些(xiē)對剪切力敏感的高分子物料如:多聚糖和DNA質粒來驗證(zhèng)該機(jī)器的低剪切力能力。


 

1.細菌和哺乳動物細胞(bāo)溶液的淨化:                                          為了決定物料通過量,我們通過(guò)不同(tóng)的進料速率和轉鼓轉速,淨化了大腸杆菌,鏈球菌的發酵(jiào)液和哺乳動物細胞培養基(jī)流體。通過幾次在不同流速下的進料,以及定期(qī)澄清液取樣(yàng)測量濁度,我們確定了物料的穩定態。為了測試我們這種行為相(xiàng)關性(xìng)的正確性,我們也用P6來(lái)淨化大腸杆菌(jun1)發酵液(yè)。

2.剪(jiǎn)切力測試:

多聚糖和DNA質粒對(duì)於剪切力都是很敏感的,我們都在15,000g的作用下處理。同樣在P6機器上,導致了多聚糖的破(pò)損,而這種23F型多聚糖是一次進料(1.0Lpm)處(chù)理完(wán)的。在STC-5機器上,15,000g處理包(bāo)含可溶(róng)解DNA質粒的(de)大腸杆菌溶液,分5次進料。(4分鍾停滯時(shí)間)。為了回收完整的(de)哺乳細胞,我們(men)先(xiān)用清水充滿轉(zhuǎn)鼓,然後再(zài)進料,這樣可防止未濕潤的進料區產生突然的(de)剪切力。


3.分析技術:

我們用(yòng)HF公司的DRT-15CE濁度計(jì)來測量濁度。為了(le)估計廢液中可溶性生成物的(de)收得率損失,在(zài)用刮刀出料後我們對(duì)固料進行稱重和分析(xī),計算出(chū)含液濾。為了驗證剪切力,我們用SSG公司的CASYTTC細胞計數(shù)器,來測量回收(shōu)到的固(gù)料中可(kě)存活的CHO哺乳細胞的數量(liàng)分布。我們通過監(jiān)測DNA的釋放量來間(jiān)接測(cè)量細胞的破損量(用熒光染色化驗法)。用OlympusAX70顯(xiǎn)微鏡來目測10微米大小的(de)哺乳動物細胞的分布。我們(men)用激光色譜法測量多聚糖分子的尺寸縮減。使用(yòng)激(jī)光折光儀(yí)和光度計,通過SDS-PAGE電泳和光密度計來測量DNA質粒(lì)的破損量,同(tóng)時反映了質粒進入疏鬆的,敞開的圓盤體和宿主細胞染色體DNA中。

 

4.結果(guǒ):

產量(liàng)和淨化效率:

表中的實驗數(shù)據表明了離心(xīn)機轉速和進料速度對淨化效率的影(yǐng)響。

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